脱盐柱的填料是什么（脱盐柱使用注意事项）

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• 1、C18脱盐柱不小心上了乙酸乙酯还能用吗？
• 2、脱盐柱原理
• 3、sephadexg―25柱层析脱盐成功的关键有哪些

C18脱盐柱不小心上了乙酸乙酯还能用吗？

碳18柱是否能够继续使用，可以先用大极性溶剂冲柱，再上样品看柱效有无差异。

例如碳18色谱柱就可以先用甲醇或乙腈小流速过夜冲柱，再进对照品或样品，查看色谱图和之前的由于明显差异。

同时观察柱压，与之前的柱压有无明显差异。

在日常生活中，应该注意碳18色谱柱应该以乙腈甲醇水作为主要洗脱溶剂，若溶剂中含有盐，应该多用高比例水冲柱，避免盐析出，堵塞色谱柱。同时可以提高色谱柱柱温，避免盐析出。

若样品不溶于大极性溶剂，则可以以石油醚乙酸乙酯等小极性溶剂先溶解，再加入甲醇乙腈等稀释，减少对色谱柱的损害。

使用色谱柱前，应活化半小时，用甲醇或乙腈小流速冲洗，使色谱柱环境稳定。

色谱柱一定要接预柱使用。(∩˃o˂∩)

脱盐柱原理

PD-10预装脱盐柱脱盐柱的填料是什么，GE公司的产品脱盐柱的填料是什么，预装填料为Sephadex G-25。 用法很简单: 1）平衡PD-10柱脱盐柱的填料是什么，可以用纯水脱盐柱的填料是什么，也可以用适宜的缓冲液，视脱盐的目的而定。

2）上样，在柱子平衡后，将样品（1.5-2.5ml）加到柱子顶上。

3）洗脱，样品全部进入柱子内后，柱顶加入水或适宜缓冲液洗脱。

（自然流速） 从加样开始计算，收集2.5~5.5ml的流出液为脱盐蛋白峰。 如果不放心，上样，洗脱，用EP管每管收集1ml，经SDS-PAGE电泳检测后，再合并样品液。

4）过柱后，充分洗涤，用20%乙醇、0.05%NaN3或0.05mol/L NaOH保存柱子。

sephadexg―25柱层析脱盐成功的关键有哪些

首先你要弄清楚这个填料的性质

Sephadex是由环氧氯丙烷和葡聚糖交联制备而成的

G-25是其中一种型号，其他还有G-10，G-50等

Sephadex G-25主要被推荐用于还有球蛋白的组群分离。这种填料用于从分子量大于5000的分子中去除盐和其他小污染物非常有效。

Sephadex G-25根据填料颗粒的大小还分成四种分别是超级粉末，粉末，中等粗和粗。颗粒的大小决定了流速和可以上样的最大样品体积。越小的颗粒，柱效越高，但是会产生更高的操作压力，需要运行的更加缓慢。

使用脱盐柱的过程中，绝大多数蛋白进行去盐或者缓冲液交换回收率大于95%

需注意为了阻止可能的离子相互作用，在脱盐过程和最终样品缓冲液中，推荐使用低盐浓度（20mM NaCl）。如果必须避免出现氯化钠，可以使用挥发性的缓冲液，比如100mM的乙酸胺。

样品需要完全溶解，高速离心或者过滤去除颗粒物质。缓冲液需要去除气泡，避免柱子中引入气泡。

一般即使样品浓度很高（＞50mg/ml）也不会影响分离效果。

如果有条件，尽量使用带有紫外和电导监控的层析系统，方便样品上样的优化。精准监控洗脱峰和盐峰。如果电导不能监控，又需要完全回收脱盐样品，上样体积应控制在柱体积的15%~20%之间

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